時間：2022-11-07 
瀏覽量： 1362 分光光度法的實驗原理是物質與光作用，具有選擇吸收的特性。有色物質的顏色是該物質與光作用產生的。即有色溶液所呈現的顏色是由于溶液中的物質對光的選擇性吸收所致。
由于不同的物質其分子結構不同，對不同波長光的吸收能力也不同，因此具有特征結構的結構集團，存在選擇吸收特性的最大實收波長，形成最大吸收峰，而產生特有的吸收光譜。即使是相同的物質由于其含量不同，對光的吸收程度也不同。
分光光度法利用物質所特有的吸收光譜來鑒別物質的存在（定性分析），或利用物質對一定波長光的吸收程度來測定物質含量（定量分析）。
分光光度法的實驗原理是：
1、光度法測定的條件：分光光度法測定物質含量時應注意的條件主要是顯色反應的條件和測定吸光度的條件。顯色反應的條件有顯色劑的用量，介質的酸度、顯色時溫度、顯色時間及干擾物質的消除方法等；測量吸光度的條件包括入射光波長的選擇、吸光度范圍和參比溶液等。
2、二氮雜菲-亞鐵絡合物：鄰二氮雜菲是測定微量鐵的一種較好的試劑。在pH=2～9的條件下Fe2+離子與鄰二氮雜菲生成穩定的橘紅色絡合物，此絡合物的lgK穩=21.3,摩爾吸光系數ε510=1.1×104 在顯色前，首先用鹽酸羥胺把Fe3＋離子還原為Fe2＋離子，其反應式如下：
2Fe3＋+2NH2OH·HCl→2Fe2＋+N2+2H2O+4H++2Cl-
測定時，控制溶液酸度在pH=5左右較為適宜。酸度過高，反應進行較慢；酸度太低，則Fe2+離子水解，影響顯色。
Bi3+，Cd2+，Hg2+，Ag+，Zn2+等離子與顯色劑生成沉淀，Ca2+，Cu2+，Ni2+等離子與顯色劑形成有色絡合物。
因此當這些離子共存時，應注意它們的干擾作用。
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