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分光光度計的原理和使用方法?

時間:2022-11-07   瀏覽量: 1523

分光光度計介紹:


分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器。該儀器是食品廠、飲用水廠辦理QS、HACCP認證的必備檢驗設備。

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分光光度計原理:

分光光度計的基本原理是溶液中的物質在光的照射下,產生了對光吸收的效應,物質對光的吸收是具有選擇性的。

各種不同的物質都具有其各自的吸收光譜,因此當某單色光通過溶液時,其能量就會被吸收而減弱,光能量減弱的程度和物質的濃度有一定的比例關系,也即符合比色原理--比耳定律

分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。


分光光度計組成:主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。


分光光度定義:


分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。


常用的波長范圍:


(1)200~400nm的紫外光區


(2)400~760nm的可見光區


(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區


所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進行校正檢定。


分光光度計的重要配件—— 比色杯


比色杯按照材質大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據不同的測量體積,有比色杯和毛細比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不適合比色法測定。因為反應中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著色,所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內測試樣品。


分光光度計操作方法:


1.接通電源,打開儀器開關,掀開樣品室暗箱蓋,預熱10分鐘。


2.將靈敏度開關調至“1”檔(若零點調節器調不到“0”時,需選用較)。


3.根據所需波長轉動波長選擇鈕。


4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內,使空白管對準光路。


5.在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器,使讀數盤指針指向t=0處。


6.蓋上暗箱蓋,調節“100”調節器,使空白管的t=100,指針穩定后逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測定管的光密度值,并記錄。


7.比色完畢,關上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈。


分光光度計注意事項:


1.該儀器應放在干燥的房間內,使用時放置在堅固平穩的工作臺上,室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風,防止燈泡燈絲發亮不穩定。


2.使用本儀器前,使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應該對儀器的安全性能進行檢查,電源接線應牢固,通電也要良好,各個調節旋鈕的起始位置應該正確,然后再按通電源開關。


3.在儀器尚未接通電源時,電表指針必須于“0”刻線上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進行調節。


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