分光光度計的基本工作原理是基于物質對光(對光的波長)的吸收具有選擇性,不同的物質都有各自的吸收光帶,所以,當光色散后的光譜通過某一溶液時,其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下,溶液中物質的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關系,即符合比爾定律。
T=I/Iolg(Io/I)=εcb
式中,T為透過率,Io為入射光強度,I為透射光強度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數,b為溶液的光徑長度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當入射光、吸收系數和溶液厚度一定時,透光率是根據溶液的濃度而變化的。
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量